Szybkie i swoiste wykrywanie infekcji Mycoplasma gallisepticum i Mycoplasma synoviae u drobiu przy użyciu jedno- i dupleksowych testów PCR

przez
Mykoplazmoza ptasia, wywoływana głównie przez Mycoplasma gallisepticum (MG) i Mycoplasma synoviae (MS), jest ważną ekonomicznie chorobą przemysłu drobiowego. Niniejsze badanie miało na celu opracowanie duplex PCR jako szybkiej, specyficznej i ekonomicznej metody dokładnego wykrywania MG i MS u drobiu oraz jej porównania z pojedynczym (monoplex) MG/MS PCR. Podczas obecnego badania przebadano łącznie 146 stad drobiu z historią kliniczną chorób układu oddechowego. Połączone próbki tkanek (tchawicy, płuc i worków powietrznych) od 3 do 4 ptaków z każdego stada pobrano podczas sekcji zwłok w laboratoriach badania chorób, Hisar, Haryana, Indie. Pojedyncze i dupleksowe testy PCR zostały wystandaryzowane przy użyciu starterów międzygenowychregion odstępnika (IGSR; 16S-23S rRNA) dla genu MG i hemaglutyniny vlhA dla MS, z oczekiwaną wielkością amplikonu odpowiednio 812 pz i 1200 pz .
W pojedynczej reakcji PCR próbki tkanek 6,85%, 2,74% i 2,74% były dodatnie odpowiednio dla MG, MS oraz zarówno MG, jak i MS. Jednak duplex PCR wykazał 7,53%, 2,74% i 1,37% pozytywny wynik odpowiednio dla MG, MS i zarówno MG, jak i MS. Przyjmując wyniki PCR monoplex jako złoty standard, czułość i swoistość opracowanego PCR dupleksowego wyniosła odpowiednio 94,44% i 100%. Co więcej, statystyka kappa Cohena (k = 0,97) zmierzyła „doskonałą” zgodność między monopleksowymi i dupleksowymi testami PCR. Stwierdzono, że dodatnie i ujemne wartości predykcyjne duplex PCR wynosiły odpowiednio 1,0 i 0,9922 przy 95% przedziale ufności (CI), w porównaniu z monoplex PCR. Jednoczesne użycie dwóch genów w dupleksowej reakcji PCR było szybsze i bardziej ekonomiczne niż dwie oddzielne pojedyncze reakcje PCR.

Wykrywanie przez multipleks  PCR  gatunków  Mycoplasma  związanych z bydłem mlecznym w Argentynie

Niewiele jest informacji na temat częstości występowania oraz cech epidemiologicznych i klinicznych związanych z obecnością Mycoplasma spp. w argentyńskich stadach mlecznych. Celem tego badania było opracowanie multipleksowego PCR do identyfikacji M.bovis i M.canadense oraz opisanie częstości występowania Mycoplasma spp. wyizolowane z próbek klinicznych przekazanych do laboratorium diagnostycznego. Z łącznej liczby 1548 próbek z infekcji wymienia, mleka ze zbiorników zbiorczych i płynów biologicznych, otrzymano 38 izolatów mykoplazm. M. bovis, M. canadense, M.californicum i M.leachii wykryto za pomocą dwóch multipleksowych reakcji PCR, potwierdzając ich obecność w warunkach klinicznych u bydła mlecznego. Techniki zastosowane w niniejszym badaniu mogą być przydatne do poszerzenia wiedzy na temat zakażeń Mycoplasma u bydła, ponieważ poszukiwania tych organizmów zwykle nie są uwzględnione w rutynowych diagnozach.

Przydatność Q-probe  PCR  u dzieci z  zakażeniem Mycoplasma  pneumniae

Aby zbadać przydatność reakcji łańcuchowej polimerazy wygaszania sondy (Q-probe PCR) do wykrywania opornych na makrolidy Mycoplasma pneumoniae (MP), przeanalizowaliśmy retrospektywnie przebieg kliniczny 21 dzieci z zakażeniem MP. Odsetek MP opornych na makrolidy wyniósł 66,7%. Czas trwania gorączki po początkowym leczeniu antybiotykami był dłuższy u pacjentów z zakażeniem MP opornym na makrolidy niż u pacjentów z zakażeniem MP wrażliwym na makrolidy. Czas trwania gorączki po Q-probe PCR nie różnił się istotnie między pacjentami z zakażeniem MP opornym na makrolidy a pacjentami z zakażeniem MP wrażliwym na makrolidy. Wyniki te sugerują, że stosowanie antybiotyków w oparciu o Q-probe PCR skróci czas trwania gorączki. Q-probe PCR przyczynia się do określenia odpowiednich antybiotyków i poprawy przebiegu klinicznego infekcji MP.

Opracowanie nowego  testu PCR  z SYBR Green I do wykrywania  Mycoplasma , Acholeplasma i  Ureaplasma  sp. w kulturach komórkowych

Mycoplasma ,  Acholeplasma i  Ureaplasma  sp. to nietypowe bakterie odpowiedzialne za zanieczyszczenia kultur komórkowych in vitro, które mogą zniekształcać wyniki. Bakterie te powodują również infekcje u ludzi i zwierząt oraz mogą prowadzić do chorób przewlekłych. W opracowanej reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) w tym badaniu zastosowano ilościowy PCR z fluorochromem SYBR Green I w celu ułatwienia  Mycoplasma ,  Acholeplasma i  Ureaplasma  sp. Wykrywanie i identyfikacja DNA.
Test przesiewowy-1 v.1 (triplex qPCR) pozwolił na wykrycie 11 gatunków. Test-1 v.2 (trzy pojedyncze qPCR) wstępnie zidentyfikował trzy podgrupy, co pozwala na ograniczenie stosowania pojedynczych qPCR w Teście-2 do identyfikacji gatunku. Zakres obu testów był zgodny z wymaganiami farmakopei dotyczącymi kontroli jakości mikrobiologicznej komórek ssaków i obejmował wykrywanie  M. arginini , M. orale , M. hyorhinis ,  M. fermentans  , M.  genitalium ,  M. hominis  , M.  pneumoniae ,  M . salivarium ,  M. pirum ,  A. laylawii i  U. urealyticum. Granica wykrywalności wahała się od 125-300 do 50-100 liczby kopii na mililitr odpowiednio w teście-1 i teście-2. Test-1 i Test-2 wykazały w pełni zgodne wyniki, co pozwoliło na oszczędność czasu wykrywania i/lub identyfikacji wybranych gatunków  Mycoplasma ,  Acholeplasma i  Ureaplasma  w testowanych hodowlach komórkowych.
PCR Mycoplasma Detection Kit
PCR Mycoplasma Detection Kit

Przewidywanie  Mycoplasma  pneumoniae i Chlamydophila pneumoniae w pozaszpitalnym zapaleniu płuc (CAP): badanie epidemiologiczne infekcji dróg oddechowych przy użyciu   testów multipleks PCR

Pozaszpitalne zapalenie płuc (CAP) jest powszechną chorobą, która może prowadzić do śmiertelności. β-laktamy są nieskuteczne wobec patogenów atypowych, w tym Mycoplasma pneumoniae. Wykorzystaliśmy badania molekularne do opracowania drzewa decyzyjnego do przewidywania atypowych patogenów z CAP oraz do badania występowania oporności na makrolidy u Mycoplasma pneumoniae. Przeprowadziliśmy prospektywne badanie obserwacyjne pacjentów w wieku ≥ 18 lat z gorączką i objawami ze strony układu oddechowego, u których zdiagnozowano CAP w jednym z dwóch szpitali środowiskowych w okresie od grudnia 2016 r. do października 2018 r. Oceniliśmy kombinacje zmiennych klinicznych, które najlepiej prognozują atypowe patogeny związane z CAP przez analiza drzewa klasyfikacji i regresji (CART). Zapalenie płuc definiowano jako objawy ze strony układu oddechowego i nowy naciek rozpoznany w RTG klatki piersiowej lub tomografii komputerowej klatki piersiowej.
Przeanalizowaliśmy 47 pacjentów (21 kobiet, 44,7%, średni wiek 47,6 lat). Patogeny atypowe wykryto u 15 pacjentów (31,9%; 12 Mycoplasma pneumoniae, 3 Chlamydophila pneumoniae). Dziesięciu pacjentów miało Mycoplasma pneumoniae oporne na makrolidy (odsetek oporności na makrolidy 83,3%). Analiza CART sugerowała, że ​​czynnikami związanymi z obecnością atypowych patogenów był brak trzeszczenia, wiek < 45 lat i LD ≥ 183 U/L (czułość 86,7% [59,5, 98,3], swoistość 96,9% [83,8, 99,9]). Nasze proste zasady podejmowania decyzji klinicznych można wykorzystać do identyfikacji pacjentów podstawowej opieki zdrowotnej z CAP, którzy są narażeni na ryzyko atypowych patogenów. Potrzebne są dalsze badania, aby potwierdzić jego przydatność w różnych populacjach.Rejestracja badania Badanie kliniczne (identyfikator badania UMIN: UMIN000035346).

Porównanie trzech  metod PCR w czasie rzeczywistym  do wykrywania opornych na makrolidy  Mycoplasma  genitalium w Szwecji

Na całym świecie obserwuje się wzrost oporności na makrolidy szczepów Mycoplasma genitalium, co ma poważny wpływ na leczenie. Celem tego badania było porównanie trzech metod PCR w czasie rzeczywistym do wykrywania oporności na makrolidy: własnej metody PCR opisanej przez Touati i wsp., ResistancePlus MG (SpeeDx) oraz S-DiaMGRes™ (Diagenode Diagnostics). Przeanalizowano sto próbek od pacjentów z dodatnim wynikiem testu M. genitalium pobranych w Szwecji oraz ilościową kontrolę DNA M. genitalium.
Oporność na makrolidy wykryto w 18, 15 i 16 próbkach odpowiednimi metodami. Sekwencjonowanie genu 23S rRNA potwierdziło oporność w 16 (16%) ze 100 próbek, w których wykryto ją dowolną z trzech metod. ResistancePlus® MG i S-DiaMGRes™ fałszywie określiły jedną próbkę jako wrażliwą na makrolidy, ale ta próbka została uznana za oporną podczas ponownego badania. Czułość metod była porównywalna, choć należy mieć świadomość możliwości nieprawidłowego określenia oporności na makrolidy, zwłaszcza próbek słabo dodatnich.

Skuteczność nowej  metody PCR z sondą gaszącą  w wykrywaniu mutacji 23S rRNA u dzieci z  zakażeniem Mycoplasma  pneumoniae

Zautomatyzowany zestaw do szybkiej diagnostyki molekularnej (Smart Gene Myco) został niedawno opracowany do indywidualnego wykrywania genów Mycoplasma pneumoniae (MP). To nowe podejście do testowania nie wymaga specjalnego sprzętu ani umiejętności i można je ukończyć w ciągu 50 minut. Oceniliśmy prospektywnie ten zestaw diagnostyczny, wraz z innymi konwencjonalnymi testami, do diagnozowania zapalenia płuc u dzieci. Próbki od 98 dzieci (50 chłopców i 48 dziewcząt; w wieku 1-14 lat; średnia: 4,7 ± 2,1 roku; mediana: 4 lata) z klinicznym rozpoznaniem zapalenia płuc zbadano pod kątem MP przy użyciu reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (RT-PCR) jako metoda referencyjna . Wyniki trzech testów diagnostyki molekularnej, przeciwciał anty-MP w surowicy i hodowli MP porównano z danymi RT-PCR.

PCR Mycoplasma Detection Kit
abx098883-100rxns Abbexa 100 rxns 644.4 EUR

PCR Mycoplasma Detection Kit
abx298017-100rxns Abbexa 100 rxns 376.8 EUR

PCR Mycoplasma Detection Kit
M034-Kit TOKU-E Kit 319.2 EUR

Mycoplasma PCR Detection Kit
K1476-100 Biovision 100 Rxns 357.6 EUR

Mycoplasma Detection Kit (OKSB00010)
OKSB00010 Aviva Systems Biology 50 Tests 458.4 EUR

Luciferase Mycoplasma Detection Kit
20-abx098882 Abbexa
  • 1479.60 EUR
  • 627.60 EUR
  • 777.60 EUR
  • 200rxns
  • 25 rxns
  • 50 rxns

Luciferase Mycoplasma Detection Kit
20-abx298016 Abbexa
  • 1212.00 EUR
  • 360.00 EUR
  • 510.00 EUR
  • 200 rxns
  • 25 rxns
  • 50 rxns

MycoBlue Mycoplasma Detector
D101-01 Vazyme 20 tests 175.2 EUR

MycoBlue Mycoplasma Detector
D101-02 Vazyme 50 tests 244.8 EUR

MULTIPLEX KIT PCR Mycoplasma (Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma synoviae) PCR kit
PCR-MPX400-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

MULTIPLEX KIT PCR Mycoplasma (Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma synoviae) PCR kit
PCR-MPX400-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

PCR-STEC Detection Kit
K1452-96 Biovision each 940.8 EUR

PCR-Salmonella Detection Kit
K1447-96 Biovision each 744 EUR

Mycoplasma sp. PCR kit
PCR-M407-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma sp. PCR kit
PCR-M407-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma suis PCR kit
PCR-M409-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma suis PCR kit
PCR-M409-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

PCR-Campylobacter Detection Kit
K1453-96 Biovision each 940.8 EUR

Mycoplasma Cynos PCR kit
PCR-V739-48D Bioingentech 48T 686.4 EUR

Mycoplasma bovis PCR kit
PCR-M578-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma bovis PCR kit
PCR-M578-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma mycoides PCR kit
PCR-M412-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma mycoides PCR kit
PCR-M412-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma hominis PCR kit
PCR-M403-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma hominis PCR kit
PCR-M403-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma synoviae PCR kit
PCR-M405-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma synoviae PCR kit
PCR-M405-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma pulmonis PCR kit
PCR-M414-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma pulmonis PCR kit
PCR-M414-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma wenyonii PCR kit
PCR-M415-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma wenyonii PCR kit
PCR-M415-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma sp. RT PCR kit
RTq-M407-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma sp. RT PCR kit
RTq-M407-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma sp. RT PCR kit
RTq-M407-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma hyorhines PCR kit
PCR-M410-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma hyorhines PCR kit
PCR-M410-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

PCR-Legionella spp Detection Kit
K1450-96 Biovision each 777.6 EUR

Mycoplasma pneumoniae PCR kit
PCR-M402-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma pneumoniae PCR kit
PCR-M402-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma haemocanis PCR kit
PCR-M406-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma haemocanis PCR kit
PCR-M406-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma haemofelis PCR kit
PCR-M411-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma haemofelis PCR kit
PCR-M411-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma suis RT PCR kit
RTq-M409-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma suis RT PCR kit
RTq-M409-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma suis RT PCR kit
RTq-M409-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma bovis RT PCR kit
RTq-M578-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma bovis RT PCR kit
RTq-M578-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma bovis RT PCR kit
RTq-M578-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma Cynos RT PCR kit
RTq-V739-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma Cynos RT PCR kit
RTq-V739-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma Cynos RT PCR kit
RTq-V739-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma mycoides RT PCR kit
RTq-M412-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma mycoides RT PCR kit
RTq-M412-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma mycoides RT PCR kit
RTq-M412-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma gallisepticum PCR kit
PCR-M404-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma gallisepticum PCR kit
PCR-M404-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma hyopneumoniae PCR kit
PCR-M408-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR

Mycoplasma hyopneumoniae PCR kit
PCR-M408-96D Bioingentech 100T 686.4 EUR

Mycoplasma hominis RT PCR kit
RTq-M403-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma hominis RT PCR kit
RTq-M403-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma hominis RT PCR kit
RTq-M403-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma synoviae RT PCR kit
RTq-M405-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma synoviae RT PCR kit
RTq-M405-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma synoviae RT PCR kit
RTq-M405-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma pulmonis RT PCR kit
RTq-M414-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma pulmonis RT PCR kit
RTq-M414-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma pulmonis RT PCR kit
RTq-M414-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma wenyonii RT PCR kit
RTq-M415-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma wenyonii RT PCR kit
RTq-M415-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma wenyonii RT PCR kit
RTq-M415-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

PCR-Salmonella-Listeria Detection Kit
K1448-96 Biovision each 940.8 EUR

PCR detection kit for Monkeypox Virus
DA1430 Daan Gene 24 test/kit 129.6 EUR

Mycoplasma hyorhines RT PCR kit
RTq-M410-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma hyorhines RT PCR kit
RTq-M410-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma hyorhines RT PCR kit
RTq-M410-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

PCR-Listeria monocytogenes Detection Kit
K1449-96 Biovision each 777.6 EUR

Mycoplasma pneumoniae RT PCR kit
RTq-M402-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma pneumoniae RT PCR kit
RTq-M402-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma pneumoniae RT PCR kit
RTq-M402-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma haemocanis RT PCR kit
RTq-M406-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma haemocanis RT PCR kit
RTq-M406-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma haemocanis RT PCR kit
RTq-M406-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma haemofelis RT PCR kit
RTq-M411-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma haemofelis RT PCR kit
RTq-M411-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma haemofelis RT PCR kit
RTq-M411-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

PCR-Legionella spp Plus Detection Kit
K1451-96 Biovision each 966 EUR

Mycoplasma sp. One-Step PCR kit
Oneq-M407-100D Bioingentech 100T 1039.2 EUR

Mycoplasma sp. One-Step PCR kit
Oneq-M407-150D Bioingentech 150T 1177.2 EUR

Mycoplasma sp. One-Step PCR kit
Oneq-M407-50D Bioingentech 50T 861.6 EUR

Mycoplasma gallisepticum RT PCR kit
RTq-M404-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma gallisepticum RT PCR kit
RTq-M404-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma gallisepticum RT PCR kit
RTq-M404-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma hyopneumoniae RT PCR kit
RTq-M408-100D Bioingentech 100T 860.4 EUR

Mycoplasma hyopneumoniae RT PCR kit
RTq-M408-150D Bioingentech 150T 969.6 EUR

Mycoplasma hyopneumoniae RT PCR kit
RTq-M408-50D Bioingentech 50T 717.6 EUR

Mycoplasma suis One-Step PCR kit
Oneq-M409-100D Bioingentech 100T 1039.2 EUR

Mycoplasma suis One-Step PCR kit
Oneq-M409-150D Bioingentech 150T 1177.2 EUR

Mycoplasma suis One-Step PCR kit
Oneq-M409-50D Bioingentech 50T 861.6 EUR

Candidatus Mycoplasma haemobos PCR kit
PCR-M418-48D Bioingentech 50T 543.6 EUR
Wśród 98 dzieci 38 było pozytywnych na posła. Wszystkie wyniki diagnostyki molekularnej wykazały pełną zgodność z danymi RT-PCR. Czułość hodowli wyniosła 64%, natomiast czułość zestawów ImmunoCard Mycoplasma i SERODIA Myco II była niższa (odpowiednio 39% i 29%). Ponadto stwierdzono istotną dodatnią korelację między liczbą kopii MP a czułością testu hodowli (r = 0,95, p = 0,048). Mutacje oporności na makrolidy w genie 23S rybosomalnego RNA wykryto u 24 z 38 dzieci za pomocą Smart Gene Myco w oparciu o reakcję PCR z sondą wygaszającą, co potwierdzono przez bezpośrednie sekwencjonowanie, ujawniając wszystkie mutacje jako A2063G. Jest to pierwsze badanie oceniające przydatność kliniczną zestawu Smart Gene Myco,

Dodaj komentarz