Zawartość karbonylków białka jest szeroko stosowana zarówno jako marker stresu oksydacyjnego, jak i miara uszkodzeń oksydacyjnych. Szeroko stosowane metody oznaczania karbonylowania białek wykorzystują reakcję grup karbonylowych z 2,4-dinitrofenylohydrazyną (DNPH) w celu wytworzenia związanych z białkami 2,4-dinitrofenylohydrazonu. Hydrazony można oznaczać ilościowo spektrofotometrycznie lub, dla większej czułości, wykrywać immunochemicznie za pomocą przeciwciał przeciwko dinitrofenylowi. Zwrócenie uwagi na metodologię jest ważne, aby uniknąć artefaktycznego podwyższenia wyników pomiarów karbonylków białek. Przebadaliśmy ekstrakty Escherichia coli, aby zidentyfikować i wyeliminować takie efekty. Zanieczyszczenie kwasem nukleinowym spowodowało poważny, artefaktyczny wzrost zawartości karbonylków białka oznaczanej technikami spektrofotometrycznymi.
Zarówno zsyntetyzowane in vitro oligonukleotydy DNA, jak i oczyszczony chromosomalny DNA silnie reagowały z 2,4-DNPH. Traktowanie ekstraktów komórkowych DNazą + RNazą lub siarczanem streptomycyny w celu wytrącenia kwasów nukleinowych dramatycznie zmniejszyło widoczny karbonyl, podczas gdy ekspozycja na proteinazę K nie.
Komercyjny zestaw do immunochemicznego wykrywania karbonylowania białek (OxyBlot firmy Chemicon/Millipore) zaleca wysokie stężenie tiolu w buforze homogenizującym. Odkryliśmy, że to zalecenie prowadzi do sztucznego podwojenia karbonylku białka, być może z powodu stymulowanej tiolem reakcji Fentona. Unikanie warunków utleniających, usuwanie kwasów nukleinowych i szybkie oznaczanie próbek może zapobiec artefaktowym wpływom na pomiary karbonylków białek.
Okołoporodowa ekspozycja na Pb2+ zmienia ekspresję genów związanych z neurorozwojowym przesunięciem GABA u szczurów po urodzeniu
Ołów (Pb2+) to neurotoksyczny środek środowiskowy, który zakłóca neurorozwoj, komunikację i organizację poprzez konkurowanie z sygnalizacją Ca2+. Jak okołoporodowa ekspozycja na Pb2+ wpływa na regulację genów związaną z Ca2+, pozostaje niejasna. Jednak Ca2+ aktywuje podjednostkę β-3 kanału wapniowego wrażliwego na napięcie typu L (Ca-β3), która autoreguluje pobudliwość neuronów i odgrywa rolę w przesunięciu GABA z neuroprzekaźnictwa pobudzającego do hamującego .
W sumie osiem samic (n = 4 kontrolne i n = 4 okołoporodowe) i cztery samce (n = 2 kontrolne i n = 2 okołoporodowe) szczurów wykorzystano jako hodowców, aby służyły jako matki i ojcowie.
- Mioty matki każdego miotu wahały się od N = 6-10 młodych na miot (M = 8, SD = 2), niezależnie od leczenia Pb2+, z przewagą samców nad samicami. Ponieważ w każdym z miotów było więcej samców niż samic, aby jak najlepiej ocenić i jednakowo kontrolować wpływ Pb2+- i miotu we wszystkich badanych punktach czasowych rozwoju, samice wykluczono ze względu na niewystarczającą dostępność wielkości próby z uzyskanego miotu. .
- Z włączonych miotów, w niniejszym badaniu wykorzystano 24 eksperymentalnie naiwne samce szczurów rasy Long Evans z kapturem (kontrola N = 12; Pb2+ N = 12). Mózgi wyekstrahowano z kory przedczołowej szczura (PFC) i hipokampu (HP) w dniu poporodowym (PND) 2, 7, 14 i 22, homogenizowano w 1 ml odczynnika TRIzol na 100 mg tkanki przy użyciu homogenizatora ze szkła teflonowego.
- Po odwirowaniu RNA wyekstrahowano chloroformem i wytrącono alkoholem izopropylowym. Próbki RNA następnie ponownie zawieszono w 100 µl H2O traktowanej DEPC. Następnie 10 μg całkowitego RNA potraktowano DNazą wolną od RNaz ( Qiagen ) w 37°C przez 1 godzinę i ponownie oczyszczono przez ekstrakcję 3:1 fenol/chloroform, a następnie wytrącanie etanolem.
- Z oczyszczonego RNA, 1 μg zastosowano w zestawie SYBR GreenER Two-Step qRT-PCR ( Invitrogen) do syntezy pierwszej nici cDNA i ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR). Wpływ okołoporodowej ekspozycji na Pb2+ na geny związane z wczesnym rozwojem neuronalnym i przesunięciem GABA oceniano poprzez ekspresję izoform Ca-β3, GABAAR-β3, NKCC1, KCC2 i GAD 80, 86, 65 i 67.

CircularRNA circ_0071269 knockdown chroni przed uszkodzeniem kardiomiopatii cukrzycowej przez oś microRNA-145/gasdermina A
Okrągłe RNA (circRNA) biorą udział w rozwoju i progresji kardiomiopatii cukrzycowej (DCM). Jednak konkretna funkcja i mechanizm leżący u podstaw circ_0071269 w DCM pozostają niejasne. W naszym badaniu ekspresję mRNA i miRNA wykrywano metodą ilościowej PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR). W celu zbadania charakterystyki circ_0071269 zastosowano traktowanie RNazą R i aktynomycyną D. W celu określenia żywotności komórek, zawartości LDH w komórkach oraz poziomu interleukiny (IL)-1β i IL-18 przeprowadzono test Cell Counting Kit -8 (CCK-8), zestawy do dehydrogenazy mleczanowej (LDH) i ELISA , odpowiednio.
Śmiertelność komórek określono za pomocą cytometrii przepływowej, a Western blot dotyczył poziomów ekspresji białka. Ponadto przeprowadzono testy reporterowe lucyferazy i testy pull-down RNA w celu potwierdzenia związku wiązania między miR-145 i circ_0071269 lub gasderminą A (GSDMA). W celu oceny uszkodzenia mięśnia sercowego in vivo przeprowadzono echokardiografię, barwienie hematoksyliną i eozyną (HE) oraz barwienie immunohistochemiczne (IHC) .
Odkryliśmy, że circ_0071269 ulegał znacznej nadekspresji w komórkach H9c2 po potraktowaniu wysokim poziomem glukozy. Powalenie circ_0071269 promowało żywotność komórek i hamowało odpowiedź zapalną, cytotoksyczność i piroptozę komórek H9c2 in vitro . Co więcej, circ_0071269 gąbki miR-145 w celu zwiększenia GSDMA. Inhibitor miR-145 antagonizował wpływ knockdown circ_0071269 na funkcje komórkowe komórek H9c2, podczas gdy wpływ miR-145 został zniesiony przez nadekspresję GSDMA . Tymczasem knockdown circ_0071269 osłabił dysfunkcję serca u myszy DM. W związku z tym circ_0071269 może promować rozwój DCM poprzez oś miR-145/GSDMA, a tym samym zapewnić nowy marker do leczenia DCM.
Circ_0001206 reguluje oś miR-665/CRKL, aby złagodzić uszkodzenie kardiomiocytów wywołane niedotlenieniem/reoksygenacją w zawale mięśnia sercowego
Zawał mięśnia sercowego (MI) to rodzaj choroby sercowo-naczyniowej spowodowanej martwicą mięśnia sercowego. Coraz więcej dowodów sugeruje, że okrągłe RNA (circRNA) odgrywają kluczową rolę w uszkodzeniu MI wywołanym niedotlenieniem/reoksygenacją serca (H/R).
Ustalono model niedotlenienia/reoksygenacji komórek H9C2 i wykryto ekspresję około 0001206 za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym. Testy rybonukleazy R ( RNazy R) i aktynomycyny D (Akt D) potwierdziły stabilność. Zestaw do liczenia komórek -8 (CCK-8), testy western blot, TUNEL i cytometria przepływowa oceniały żywotność komórek i apoptozę komórek. Obniżanie RNA, immunoprecypitacja białek wiążących RNA (RIP) i testy reporterowe lucyferazy badały mechanizmy leżące u podstaw MI. Wszystkie dane eksperymentalne zostały przedstawione ze średnią ± odchylenie standardowe (SD) i P < 0,05 wskazywały na istotność statystyczną. Circ_0001206 miał niską ekspresję w komórkach H9C2 poddanych działaniu H/R. Circ_0001206 powstał w wyniku cyklizacji CRK, takiego jak protoonkogen, białko adaptacyjne (CRKL). Nadekspresja Circ_0001206 promowała żywotność komórek i hamowała apoptozę kardiomiocytów. Potwierdzono, że circ_0001206 reguluje ekspresję CRKL poprzez działanie jako konkurujący endogenny RNA (ceRNA) mikroRNA-665 (miR-665). CRKL odegrał ochronną rolę w MI.
Okrągły RNA circ_0000644 promuje progresję raka brodawkowatego tarczycy poprzez gąbkę miR-1205 i regulację ekspresji E2F3
Rozregulowanie kolistych RNA (circRNA) ułatwia nowotworzenie raka brodawkowatego tarczycy (PTC). Celem tego badania było określenie funkcji i mechanizmu circ_0000644 w regulowaniu rozwoju PTC. Ekspresje Circ_0000644, microRNA-1205 (miR-1205) i E2F czynnika transkrypcyjnego 3 (E2F3) wykryto za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (qRT-PCR). Testy z aktynomycyną D (ActD) i rybonukleazą R ( RNaza R) zastosowano do weryfikacji kołowej charakterystyki circ_0000644. Po stłumieniu circ_0000644 wzrost komórek PTC, migrację, inwazję i apoptozę oceniano odpowiednio za pomocą zestawu do liczenia komórek -8 (CCK-8), testu Transwell i analizy cytometrii przepływowej.
PI/RNAse |
|||
PI/RNASE | ImmunoStep | 200 test | 173.5 EUR |
DNase (RNase-free) |
|||
abx098138-1500U | Abbexa | 1500 U | 453 EUR |
DNASE I, RNASE FREE |
|||
DD0649 | Bio Basic | 50KU | 448.03 EUR |
RNase-Free DNase Set |
|||
BS88253 | Bio Basic | 50preps | 145.92 EUR |
Fungi/ Yeast Genomic DNA Extraction Mini Kit(50prep)- RNase A |
|||
FAFYG001-RNASE | Favorgen | 50 preps | 303 EUR |
DNase I (not RNase FREE) |
|||
DD0099 | Bio Basic | 250mg | 97.85 EUR |
Agarose Tablets , DNase/RNase Free |
|||
BIO-41027 | Bioline | 300g | Ask for price |
PCR Mycoplasma Detection Kit |
|||
M034-Kit | TOKU-E | Kit | 266 EUR |
Fungi/ Yeast Genomic DNA Extraction Mini Kit(100prep)- RNase A |
|||
FAFYG001-1-RNASE | Favorgen | 100 preps | 448 EUR |
EZ Q2 (DNASE, RNASE-Be-Gone) Solution |
|||
RT4201 | Bio Basic | 50ml | 115.25 EUR |
Sterile DNase/RNase-free Filtered Pipette Tip |
|||
AI10R5 | Abclonal | 10μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Universal Pipette Tip |
|||
AI200R1 | Abclonal | 200μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Filtered Pipette Tip |
|||
AI200R3 | Abclonal | 200μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Filtered Pipette Tip |
|||
AI20R1 | Abclonal | 20μL | Ask for price |
RNase Activity Detection/Quantification Assay Kit (Fluorometric) |
|||
K934-100 | Biovision | 479 EUR | |
Water, Ultra Pure, Free of DNase, RNase, Protease, Endonuclease |
|||
WW1002 | Bio Basic | 100ml | 56.09 EUR |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI1000R7 | Abclonal | 1000μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI100R2 | Abclonal | 100μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI10R7 | Abclonal | 10μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI200R4 | Abclonal | 200μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI20R2 | Abclonal | 20μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Long Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI10R8 | Abclonal | 10μL | Ask for price |
DNase-I/ Rat DNase- I ELISA Kit |
|||
ELA-E1127r | Lifescience Market | 96 Tests | 886 EUR |
PLT,96WL,HALF AREA,UV,NT,RNASE/DNASE FREE,NS,BK,25/50 |
|||
3679 | CORNING | 25/pk | 671 EUR |
RNase A |
|||
abx098139-1ml | Abbexa | 1 ml | 217 EUR |
PI / RNAse |
|||
abx290029-200tests | Abbexa | 200 tests | 272 EUR |
RNase A |
|||
RB0473 | Bio Basic | 500mg | 183.11 EUR |
RNase A |
|||
RN103-001 | GenDepot | 300mg | 2615 EUR |
RNase A |
|||
M1227-25 | Biovision | 245 EUR | |
RNase R |
|||
M1228-500 | Biovision | 365 EUR | |
Sheep RNase ELISA Kit |
|||
ESR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rabbit RNase ELISA Kit |
|||
ERTR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Monkey RNase ELISA Kit |
|||
EMKR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Mouse RNase ELISA Kit |
|||
EMR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Porcine RNase ELISA Kit |
|||
EPR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rat RNase ELISA Kit |
|||
ERR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Canine RNase ELISA Kit |
|||
ECR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Bovine RNase ELISA Kit |
|||
EBR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Chicken RNase ELISA Kit |
|||
ECKR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Goat RNase ELISA Kit |
|||
EGTR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Human RNase ELISA Kit |
|||
EHR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Anserini RNASE ELISA Kit |
|||
EAR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
RNASE ELISA KIT|Human |
|||
EF007146 | Lifescience Market | 96 Tests | 689 EUR |
DNase I |
|||
DN102-001 | GenDepot | 100mg | 1441 EUR |
DNase I |
|||
M1230-2000 | Biovision | 289 EUR | |
Human Ribonuclease(RNASE)ELISA Kit |
|||
GA-E0783HM-48T | GenAsia Biotech | 48T | 289 EUR |
Human Ribonuclease(RNASE)ELISA Kit |
|||
GA-E0783HM-96T | GenAsia Biotech | 96T | 466 EUR |
Guinea Pig RNase ELISA Kit |
|||
EGR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit |
|||
201-12-0767 | SunredBio | 96 tests | 440 EUR |
Human Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
|||
abx253109-96tests | Abbexa | 96 tests | 707 EUR |
Chicken Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
|||
abx354731-96tests | Abbexa | 96 tests | 825 EUR |
Monkey Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
|||
abx355046-96tests | Abbexa | 96 tests | 825 EUR |
Pig Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
|||
abx355190-96tests | Abbexa | 96 tests | 825 EUR |
Rabbit Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
|||
abx355297-96tests | Abbexa | 96 tests | 825 EUR |
Human Ribonuclease(RNASE)ELISA Kit |
|||
QY-E03180 | Qayee Biotechnology | 96T | 361 EUR |
Human RNASE(Ribonuclease) ELISA Kit |
|||
EH3719 | FN Test | 96T | 524.1 EUR |
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit |
|||
CN-04532H1 | ChemNorm | 96T | 447 EUR |
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit |
|||
CN-04532H2 | ChemNorm | 48T | 296 EUR |
Rnase A, Pancreatic |
|||
abx082443-25mg | Abbexa | 25 mg | 189 EUR |
RNase-Free water |
|||
abx098145-25ml | Abbexa | 25 ml | 175 EUR |
Rnase (90–105) |
|||
5-01885 | CHI Scientific | 4 x 1mg | Ask for price |
RNase A (MBG) |
|||
409-050 | GeneOn | 50 mg | 73 EUR |
RNase A (MBG) |
|||
409-250 | GeneOn | 250 mg | 193 EUR |
RNase T2 Antibody |
|||
abx237324-100ug | Abbexa | 100 ug | 509 EUR |
RNase 1 Antibody |
|||
20-abx141499 | Abbexa |
|
|
RNase 13 Antibody |
|||
20-abx141582 | Abbexa |
|
|
Rnase A, 1g |
|||
R9001-1g | ACTGene | 822 EUR | |
Rnase A, 250mg |
|||
R9001-250mg | ACTGene | 281 EUR | |
RiboSafe RNase Inhibitor |
|||
BIO-65027 | Bioline | 2500 Units | Ask for price |
RiboSafe RNase Inhibitor |
|||
BIO-65028 | Bioline | 10,000 Units | Ask for price |
RNAse H2A Antibody |
|||
24819-100ul | SAB | 100ul | 390 EUR |
RNase A Solution |
|||
G118 | ABM | 1.0 ml; 10 mg/ml | 102 EUR |
Thermostable RNAse H |
|||
M1224-100 | Biovision | 321 EUR | |
RNase III, E.coli |
|||
M1226-100 | Biovision | 224 EUR | |
Murine Rnase inhibitor |
|||
R301-01 | Vazyme | 2000 U | 116 EUR |
Murine Rnase inhibitor |
|||
R301-02 | Vazyme | 10000 U | 166 EUR |
Murine Rnase inhibitor |
|||
R301-03 | Vazyme | 20000 U | 219 EUR |
anti-RNase H1 |
|||
YF-PA26995 | Abfrontier | 50 ul | 334 EUR |
anti-RNase L |
|||
YF-PA24584 | Abfrontier | 50 ul | 334 EUR |
RNAse H2A Antibody |
|||
4979-002mg | ProSci | 0.02 mg | 171.82 EUR |
RNAse H2A Antibody |
|||
4979-01mg | ProSci | 0.1 mg | 436.42 EUR |
RNase L Peptide |
|||
46-735P | ProSci | 0.1 mg | 338 EUR |
RNAse H2A Peptide |
|||
4979P | ProSci | 0.05 mg | 164.75 EUR |
Sheep Dnase I ELISA Kit |
|||
ESD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Mouse Dnase I ELISA Kit |
|||
EMD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Mouse Dnase-I ELISA Kit |
|||
EMD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Monkey Dnase I ELISA Kit |
|||
EMKD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Porcine Dnase I ELISA Kit |
|||
EPD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Porcine Dnase-I ELISA Kit |
|||
EPD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rat Dnase I ELISA Kit |
|||
ERD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rat Dnase-I ELISA Kit |
|||
ERD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rabbit Dnase I ELISA Kit |
|||
ERTD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rabbit Dnase-I ELISA Kit |
|||
ERTD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Anserini Dnase-I ELISA Kit |
|||
EAD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Goat Dnase I ELISA Kit |
|||
EGTD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Goat Dnase-I ELISA Kit |
|||
EGTD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Canine Dnase I ELISA Kit |
|||
ECD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Canine Dnase-I ELISA Kit |
|||
ECD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Chicken Dnase I ELISA Kit |
|||
ECKD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Human Dnase I ELISA Kit |
|||
EHD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Zależności regulacyjne między circ_0000644, E2F3 i miR-1205 potwierdzono w teście immunoprecypitacji RNA (RIP) i teście reporterowym z podwójną lucyferazą. Poza tym wpływy regulacyjne circ_0000644 na poziom białka E2F3 analizowano metodą Western blot. W PTC circ_0000644 wykazywał wysoką ekspresję i był zlokalizowany głównie w cytoplazmie i miał stabilną strukturę. Uderzenie circ_0000644 zahamowało wzrost, migrację i inwazję komórek PTC oraz ułatwiło apoptozę. Circ_0000644 mógł bezpośrednio oddziaływać z miR-1205 w celu zahamowania ekspresji miR-1205 i służył jako gąbka miR-1205 do modulowania ekspresji E2F3 w komórkach PTC. Circ_0000644 zwiększa ekspresję E2F3 przez gąbkowanie miR-1205 w celu promowania progresji PTC.