Zawartość karbonylków białka jest szeroko stosowana zarówno jako marker stresu oksydacyjnego, jak i miara uszkodzeń oksydacyjnych. Szeroko stosowane metody oznaczania karbonylowania białek wykorzystują reakcję grup karbonylowych z 2,4-dinitrofenylohydrazyną (DNPH) w celu wytworzenia związanych z białkami 2,4-dinitrofenylohydrazonu. Hydrazony można oznaczać ilościowo spektrofotometrycznie lub, dla większej czułości, wykrywać immunochemicznie za pomocą przeciwciał przeciwko dinitrofenylowi. Zwrócenie uwagi na metodologię jest ważne, aby uniknąć artefaktycznego podwyższenia wyników pomiarów karbonylków białek. Przebadaliśmy ekstrakty Escherichia coli, aby zidentyfikować i wyeliminować takie efekty. Zanieczyszczenie kwasem nukleinowym spowodowało poważny, artefaktyczny wzrost zawartości karbonylków białka oznaczanej technikami spektrofotometrycznymi.
Zarówno zsyntetyzowane in vitro oligonukleotydy DNA, jak i oczyszczony chromosomalny DNA silnie reagowały z 2,4-DNPH. Traktowanie ekstraktów komórkowych DNazą + RNazą lub siarczanem streptomycyny w celu wytrącenia kwasów nukleinowych dramatycznie zmniejszyło widoczny karbonyl, podczas gdy ekspozycja na proteinazę K nie.
Komercyjny zestaw do immunochemicznego wykrywania karbonylowania białek (OxyBlot firmy Chemicon/Millipore) zaleca wysokie stężenie tiolu w buforze homogenizującym. Odkryliśmy, że to zalecenie prowadzi do sztucznego podwojenia karbonylku białka, być może z powodu stymulowanej tiolem reakcji Fentona. Unikanie warunków utleniających, usuwanie kwasów nukleinowych i szybkie oznaczanie próbek może zapobiec artefaktowym wpływom na pomiary karbonylków białek.
Okołoporodowa ekspozycja na Pb2+ zmienia ekspresję genów związanych z neurorozwojowym przesunięciem GABA u szczurów po urodzeniu
Ołów (Pb2+) to neurotoksyczny środek środowiskowy, który zakłóca neurorozwoj, komunikację i organizację poprzez konkurowanie z sygnalizacją Ca2+. Jak okołoporodowa ekspozycja na Pb2+ wpływa na regulację genów związaną z Ca2+, pozostaje niejasna. Jednak Ca2+ aktywuje podjednostkę β-3 kanału wapniowego wrażliwego na napięcie typu L (Ca-β3), która autoreguluje pobudliwość neuronów i odgrywa rolę w przesunięciu GABA z neuroprzekaźnictwa pobudzającego do hamującego .
W sumie osiem samic (n = 4 kontrolne i n = 4 okołoporodowe) i cztery samce (n = 2 kontrolne i n = 2 okołoporodowe) szczurów wykorzystano jako hodowców, aby służyły jako matki i ojcowie.
- Mioty matki każdego miotu wahały się od N = 6-10 młodych na miot (M = 8, SD = 2), niezależnie od leczenia Pb2+, z przewagą samców nad samicami. Ponieważ w każdym z miotów było więcej samców niż samic, aby jak najlepiej ocenić i jednakowo kontrolować wpływ Pb2+- i miotu we wszystkich badanych punktach czasowych rozwoju, samice wykluczono ze względu na niewystarczającą dostępność wielkości próby z uzyskanego miotu. .
- Z włączonych miotów, w niniejszym badaniu wykorzystano 24 eksperymentalnie naiwne samce szczurów rasy Long Evans z kapturem (kontrola N = 12; Pb2+ N = 12). Mózgi wyekstrahowano z kory przedczołowej szczura (PFC) i hipokampu (HP) w dniu poporodowym (PND) 2, 7, 14 i 22, homogenizowano w 1 ml odczynnika TRIzol na 100 mg tkanki przy użyciu homogenizatora ze szkła teflonowego.
- Po odwirowaniu RNA wyekstrahowano chloroformem i wytrącono alkoholem izopropylowym. Próbki RNA następnie ponownie zawieszono w 100 µl H2O traktowanej DEPC. Następnie 10 μg całkowitego RNA potraktowano DNazą wolną od RNaz ( Qiagen ) w 37°C przez 1 godzinę i ponownie oczyszczono przez ekstrakcję 3:1 fenol/chloroform, a następnie wytrącanie etanolem.
- Z oczyszczonego RNA, 1 μg zastosowano w zestawie SYBR GreenER Two-Step qRT-PCR ( Invitrogen) do syntezy pierwszej nici cDNA i ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR). Wpływ okołoporodowej ekspozycji na Pb2+ na geny związane z wczesnym rozwojem neuronalnym i przesunięciem GABA oceniano poprzez ekspresję izoform Ca-β3, GABAAR-β3, NKCC1, KCC2 i GAD 80, 86, 65 i 67.

CircularRNA circ_0071269 knockdown chroni przed uszkodzeniem kardiomiopatii cukrzycowej przez oś microRNA-145/gasdermina A
Okrągłe RNA (circRNA) biorą udział w rozwoju i progresji kardiomiopatii cukrzycowej (DCM). Jednak konkretna funkcja i mechanizm leżący u podstaw circ_0071269 w DCM pozostają niejasne. W naszym badaniu ekspresję mRNA i miRNA wykrywano metodą ilościowej PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR). W celu zbadania charakterystyki circ_0071269 zastosowano traktowanie RNazą R i aktynomycyną D. W celu określenia żywotności komórek, zawartości LDH w komórkach oraz poziomu interleukiny (IL)-1β i IL-18 przeprowadzono test Cell Counting Kit -8 (CCK-8), zestawy do dehydrogenazy mleczanowej (LDH) i ELISA , odpowiednio.
Śmiertelność komórek określono za pomocą cytometrii przepływowej, a Western blot dotyczył poziomów ekspresji białka. Ponadto przeprowadzono testy reporterowe lucyferazy i testy pull-down RNA w celu potwierdzenia związku wiązania między miR-145 i circ_0071269 lub gasderminą A (GSDMA). W celu oceny uszkodzenia mięśnia sercowego in vivo przeprowadzono echokardiografię, barwienie hematoksyliną i eozyną (HE) oraz barwienie immunohistochemiczne (IHC) .
Odkryliśmy, że circ_0071269 ulegał znacznej nadekspresji w komórkach H9c2 po potraktowaniu wysokim poziomem glukozy. Powalenie circ_0071269 promowało żywotność komórek i hamowało odpowiedź zapalną, cytotoksyczność i piroptozę komórek H9c2 in vitro . Co więcej, circ_0071269 gąbki miR-145 w celu zwiększenia GSDMA. Inhibitor miR-145 antagonizował wpływ knockdown circ_0071269 na funkcje komórkowe komórek H9c2, podczas gdy wpływ miR-145 został zniesiony przez nadekspresję GSDMA . Tymczasem knockdown circ_0071269 osłabił dysfunkcję serca u myszy DM. W związku z tym circ_0071269 może promować rozwój DCM poprzez oś miR-145/GSDMA, a tym samym zapewnić nowy marker do leczenia DCM.
Circ_0001206 reguluje oś miR-665/CRKL, aby złagodzić uszkodzenie kardiomiocytów wywołane niedotlenieniem/reoksygenacją w zawale mięśnia sercowego
Zawał mięśnia sercowego (MI) to rodzaj choroby sercowo-naczyniowej spowodowanej martwicą mięśnia sercowego. Coraz więcej dowodów sugeruje, że okrągłe RNA (circRNA) odgrywają kluczową rolę w uszkodzeniu MI wywołanym niedotlenieniem/reoksygenacją serca (H/R).
Ustalono model niedotlenienia/reoksygenacji komórek H9C2 i wykryto ekspresję około 0001206 za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym. Testy rybonukleazy R ( RNazy R) i aktynomycyny D (Akt D) potwierdziły stabilność. Zestaw do liczenia komórek -8 (CCK-8), testy western blot, TUNEL i cytometria przepływowa oceniały żywotność komórek i apoptozę komórek. Obniżanie RNA, immunoprecypitacja białek wiążących RNA (RIP) i testy reporterowe lucyferazy badały mechanizmy leżące u podstaw MI. Wszystkie dane eksperymentalne zostały przedstawione ze średnią ± odchylenie standardowe (SD) i P < 0,05 wskazywały na istotność statystyczną. Circ_0001206 miał niską ekspresję w komórkach H9C2 poddanych działaniu H/R. Circ_0001206 powstał w wyniku cyklizacji CRK, takiego jak protoonkogen, białko adaptacyjne (CRKL). Nadekspresja Circ_0001206 promowała żywotność komórek i hamowała apoptozę kardiomiocytów. Potwierdzono, że circ_0001206 reguluje ekspresję CRKL poprzez działanie jako konkurujący endogenny RNA (ceRNA) mikroRNA-665 (miR-665). CRKL odegrał ochronną rolę w MI.
Okrągły RNA circ_0000644 promuje progresję raka brodawkowatego tarczycy poprzez gąbkę miR-1205 i regulację ekspresji E2F3
Rozregulowanie kolistych RNA (circRNA) ułatwia nowotworzenie raka brodawkowatego tarczycy (PTC). Celem tego badania było określenie funkcji i mechanizmu circ_0000644 w regulowaniu rozwoju PTC. Ekspresje Circ_0000644, microRNA-1205 (miR-1205) i E2F czynnika transkrypcyjnego 3 (E2F3) wykryto za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (qRT-PCR). Testy z aktynomycyną D (ActD) i rybonukleazą R ( RNaza R) zastosowano do weryfikacji kołowej charakterystyki circ_0000644. Po stłumieniu circ_0000644 wzrost komórek PTC, migrację, inwazję i apoptozę oceniano odpowiednio za pomocą zestawu do liczenia komórek -8 (CCK-8), testu Transwell i analizy cytometrii przepływowej.
PI/RNAse |
|||
PI/RNASE | ImmunoStep | 200 test | 208.2 EUR |
DNase (RNase-free) |
|||
abx098138-1500U | Abbexa | 1500 U | 543.6 EUR |
DNASE I, RNASE FREE |
|||
DD0649 | Bio Basic | 50KU | 537.64 EUR |
RNase-Free DNase Set |
|||
BS88253 | Bio Basic | 50preps | 175.1 EUR |
RNase FREE, 250ml Bottle Removes RNase & DNAse |
|||
10-172 | Genesee Scientific | 1 Bottle/Unit | 269 EUR |
Fungi/ Yeast Genomic DNA Extraction Mini Kit(50prep)- RNase A |
|||
FAFYG001-RNASE | Favorgen | 50 preps | 363.6 EUR |
RNase FREE, 1 Liter Bottle Removes RNase & DNAse |
|||
10-173 | Genesee Scientific | 1 Bottle/Unit | 337 EUR |
RNase FREE, 475ml Spray Bottle Removes RNase & DNAse |
|||
10-228 | Genesee Scientific | 1 Spray Bottle/Unit | 300 EUR |
RNase FREE, 4 Liter Bottle Removes RNase & DNAse |
|||
10-456 | Genesee Scientific | 1 Bottle/Unit | 403 EUR |
DNase I (not RNase FREE) |
|||
DD0099 | Bio Basic | 250mg | 117.42 EUR |
Agarose Tablets , DNase/RNase Free |
|||
BIO-41027 | Bioline | 300g | Ask for price |
PCR Mycoplasma Detection Kit |
|||
M034-Kit | TOKU-E | Kit | 319.2 EUR |
Fungi/ Yeast Genomic DNA Extraction Mini Kit(100prep)- RNase A |
|||
FAFYG001-1-RNASE | Favorgen | 100 preps | 537.6 EUR |
Sterile DNase/RNase-free Filtered Pipette Tip |
|||
AI10R5 | Abclonal | 10μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Universal Pipette Tip |
|||
AI200R1 | Abclonal | 200μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Filtered Pipette Tip |
|||
AI200R3 | Abclonal | 200μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Filtered Pipette Tip |
|||
AI20R1 | Abclonal | 20μL | Ask for price |
EZ Q2 (DNASE, RNASE-Be-Gone) Solution |
|||
RT4201 | Bio Basic | 50ml | 138.3 EUR |
RNase Activity Detection/Quantification Assay Kit (Fluorometric) |
|||
K934-100 | Biovision | each | 574.8 EUR |
.5mL Pestles DNase RNase + pyrogen free Ind. Wrap |
|||
ARG1530 | Scientific Laboratory Supplies | PK100 | 177.84 EUR |
0.5 ml Pestle+Microtube DNase RNase + pyrogen free |
|||
ARG1540 | Scientific Laboratory Supplies | PK100 | 215.46 EUR |
DEPC Treated Water, 1L RNase, DNase FREE, Sterile |
|||
20-138 | Genesee Scientific | 1 Bottle/Unit | 287 EUR |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI1000R7 | Abclonal | 1000μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI100R2 | Abclonal | 100μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI10R7 | Abclonal | 10μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI200R4 | Abclonal | 200μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI20R2 | Abclonal | 20μL | Ask for price |
Water, Ultra Pure, Free of DNase, RNase, Protease, Endonuclease |
|||
WW1002 | Bio Basic | 100ml | 67.31 EUR |
Sterile DNase/RNase-free Long Low Retention Filtered Pipette Tip |
|||
AI10R8 | Abclonal | 10μL | Ask for price |
15 mL ClearLine microtubes with snap cap RNase DNase free |
|||
DD390690 | Scientific Laboratory Supplies | PK1000 | 22.8 EUR |
2 mL ClearLine microtubes with snap cap RNase DNase free |
|||
DD390692 | Scientific Laboratory Supplies | PK1000 | 26.22 EUR |
Nunc White Rayon adhesive sealing tape RNase and DNase free |
|||
241205 | Scientific Laboratory Supplies | PK50 | 204.06 EUR |
Coloured pestle (assorted colours) microtube 1.5 mL RNase and DNase free |
|||
DD45422 | Scientific Laboratory Supplies | PK10 | 25.08 EUR |
Eppendorf tubes 5mL amber sterile pyrogen DNase RNase and DNA free |
|||
E0030122330 | Scientific Laboratory Supplies | PK200 | 72.96 EUR |
DNase-I/ Rat DNase- I ELISA Kit |
|||
ELA-E1127r | Lifescience Market | 96 Tests | 1063.2 EUR |
SLS Select Sterile Skirted Centrifuge Tube DNase and RNase free 50ml Sterile Bagged |
|||
SLS8114 | Scientific Laboratory Supplies | PK500 | 291.84 EUR |
Sheep RNase ELISA Kit |
|||
ESR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Human RNase ELISA Kit |
|||
EHR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Porcine RNase ELISA Kit |
|||
EPR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Monkey RNase ELISA Kit |
|||
EMKR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Mouse RNase ELISA Kit |
|||
EMR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Rat RNase ELISA Kit |
|||
ERR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Rabbit RNase ELISA Kit |
|||
ERTR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Goat RNase ELISA Kit |
|||
EGTR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Anserini RNASE ELISA Kit |
|||
EAR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Bovine RNase ELISA Kit |
|||
EBR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
RNASE ELISA KIT|Human |
|||
EF007146 | Lifescience Market | 96 Tests | 826.8 EUR |
Chicken RNase ELISA Kit |
|||
ECKR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Canine RNase ELISA Kit |
|||
ECR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
RNase A |
|||
abx098139-1ml | Abbexa | 1 ml | 260.4 EUR |
PI / RNAse |
|||
abx290029-200tests | Abbexa | 200 tests | 326.4 EUR |
RNase A |
|||
RB0473 | Bio Basic | 500mg | 219.73 EUR |
RNase A |
|||
RN103-001 | GenDepot | 300mg | 3138 EUR |
RNase A |
|||
M1227-25 | Biovision | each | 294 EUR |
RNase R |
|||
M1228-500 | Biovision | each | 438 EUR |
DNase I |
|||
DN102-001 | GenDepot | 100mg | 1729.2 EUR |
DNase Medium |
|||
MED1196 | Scientific Laboratory Supplies | PK10 | 7.98 EUR |
DNase Agar |
|||
MED1392 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 124.26 EUR |
DNase I |
|||
M1230-2000 | Biovision | each | 346.8 EUR |
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit |
|||
CN-04532H1 | ChemNorm | 96T | 536.4 EUR |
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit |
|||
CN-04532H2 | ChemNorm | 48T | 355.2 EUR |
Human RNASE(Ribonuclease) ELISA Kit |
|||
EH3719 | FN Test | 96T | 628.92 EUR |
Chicken Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
|||
abx354731-96tests | Abbexa | 96 tests | 990 EUR |
Monkey Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
|||
abx355046-96tests | Abbexa | 96 tests | 990 EUR |
Pig Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
|||
abx355190-96tests | Abbexa | 96 tests | 990 EUR |
Rabbit Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
|||
abx355297-96tests | Abbexa | 96 tests | 990 EUR |
Human Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
|||
abx253109-96tests | Abbexa | 96 tests | 848.4 EUR |
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit |
|||
201-12-0767 | SunredBio | 96 tests | 528 EUR |
Guinea Pig RNase ELISA Kit |
|||
EGR0364 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Human Ribonuclease(RNASE)ELISA Kit |
|||
GA-E0783HM-48T | GenAsia Biotech | 48T | 346.8 EUR |
Human Ribonuclease(RNASE)ELISA Kit |
|||
GA-E0783HM-96T | GenAsia Biotech | 96T | 559.2 EUR |
Human Ribonuclease(RNASE)ELISA Kit |
|||
QY-E03180 | Qayee Biotechnology | 96T | 433.2 EUR |
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit |
|||
YLA2396HU-48T | Shanghai YL Biotech | 48T | 435 EUR |
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit |
|||
YLA2396HU-96T | Shanghai YL Biotech | 96T | 562.5 EUR |
PCR plate 96-well non-skirted Standard clear 50 pcs. PP DNase-/RNase- DNA-free |
|||
781368 | Scientific Laboratory Supplies | PK50 | 236.09 EUR |
PCR plate 96-well semi-skirted Standard clear 50 pcs. PP DNase-/RNase- DNA-free |
|||
781375 | Scientific Laboratory Supplies | PK50 | 236.09 EUR |
RNase H1 Antibody |
|||
DF12084 | Affbiotech | 200ul | 420 EUR |
RNase L Peptide |
|||
46-735P | ProSci | 0.1 mg | 405.6 EUR |
RNAse H2A Antibody |
|||
4979-002mg | ProSci | 0.02 mg | 206.18 EUR |
RNAse H2A Antibody |
|||
4979-01mg | ProSci | 0.1 mg | 523.7 EUR |
RNAse H2A Peptide |
|||
4979P | ProSci | 0.05 mg | 197.7 EUR |
Rnase (90–105) |
|||
5-01885 | CHI Scientific | 4 x 1mg | Ask for price |
RNase A (MBG) |
|||
409-050 | GeneOn | 50 mg | 87.6 EUR |
RNase A (MBG) |
|||
409-250 | GeneOn | 250 mg | 231.6 EUR |
RNAse H2A Antibody |
|||
24819-100ul | SAB | 100ul | 468 EUR |
Rnase A, Pancreatic |
|||
abx082443-25mg | Abbexa | 25 mg | 226.8 EUR |
RNase-Free water |
|||
abx098145-25ml | Abbexa | 25 ml | 210 EUR |
RNase 1 Antibody |
|||
20-abx141499 | Abbexa |
|
|
RNase 13 Antibody |
|||
20-abx141582 | Abbexa |
|
|
RNase T2 Antibody |
|||
abx237324-100ug | Abbexa | 100 ug | 610.8 EUR |
RiboSafe RNase Inhibitor |
|||
BIO-65027 | Bioline | 2500 Units | Ask for price |
RiboSafe RNase Inhibitor |
|||
BIO-65028 | Bioline | 10,000 Units | Ask for price |
RNase A Solution |
|||
G118 | ABM | 1.0 ml; 10 mg/ml | 122.4 EUR |
Murine Rnase inhibitor |
|||
R301-01 | Vazyme | 2000 U | 139.2 EUR |
Murine Rnase inhibitor |
|||
R301-02 | Vazyme | 10000 U | 199.2 EUR |
Murine Rnase inhibitor |
|||
R301-03 | Vazyme | 20000 U | 262.8 EUR |
anti-RNase H1 |
|||
YF-PA26995 | Abfrontier | 50 ul | 400.8 EUR |
anti-RNase L |
|||
YF-PA24584 | Abfrontier | 50 ul | 400.8 EUR |
Rnase A, 1g |
|||
R9001-1g | ACTGene | each | 986.4 EUR |
Rnase A, 250mg |
|||
R9001-250mg | ACTGene | each | 337.2 EUR |
Zależności regulacyjne między circ_0000644, E2F3 i miR-1205 potwierdzono w teście immunoprecypitacji RNA (RIP) i teście reporterowym z podwójną lucyferazą. Poza tym wpływy regulacyjne circ_0000644 na poziom białka E2F3 analizowano metodą Western blot. W PTC circ_0000644 wykazywał wysoką ekspresję i był zlokalizowany głównie w cytoplazmie i miał stabilną strukturę. Uderzenie circ_0000644 zahamowało wzrost, migrację i inwazję komórek PTC oraz ułatwiło apoptozę. Circ_0000644 mógł bezpośrednio oddziaływać z miR-1205 w celu zahamowania ekspresji miR-1205 i służył jako gąbka miR-1205 do modulowania ekspresji E2F3 w komórkach PTC. Circ_0000644 zwiększa ekspresję E2F3 przez gąbkowanie miR-1205 w celu promowania progresji PTC.