Zawartość karbonylków białka jest szeroko stosowana zarówno jako marker stresu oksydacyjnego, jak i miara uszkodzeń oksydacyjnych. Szeroko stosowane metody oznaczania karbonylowania białek wykorzystują reakcję grup karbonylowych z 2,4-dinitrofenylohydrazyną (DNPH) w celu wytworzenia związanych z białkami 2,4-dinitrofenylohydrazonu. Hydrazony można oznaczać ilościowo spektrofotometrycznie lub, dla większej czułości, wykrywać immunochemicznie za pomocą przeciwciał przeciwko dinitrofenylowi. Zwrócenie uwagi na metodologię jest ważne, aby uniknąć artefaktycznego podwyższenia wyników pomiarów karbonylków białek. Przebadaliśmy ekstrakty Escherichia coli, aby zidentyfikować i wyeliminować takie efekty. Zanieczyszczenie kwasem nukleinowym spowodowało poważny, artefaktyczny wzrost zawartości karbonylków białka oznaczanej technikami spektrofotometrycznymi.
Zarówno zsyntetyzowane in vitro oligonukleotydy DNA, jak i oczyszczony chromosomalny DNA silnie reagowały z 2,4-DNPH. Traktowanie ekstraktów komórkowych DNazą + RNazą lub siarczanem streptomycyny w celu wytrącenia kwasów nukleinowych dramatycznie zmniejszyło widoczny karbonyl, podczas gdy ekspozycja na proteinazę K nie.
Komercyjny zestaw do immunochemicznego wykrywania karbonylowania białek (OxyBlot firmy Chemicon/Millipore) zaleca wysokie stężenie tiolu w buforze homogenizującym. Odkryliśmy, że to zalecenie prowadzi do sztucznego podwojenia karbonylku białka, być może z powodu stymulowanej tiolem reakcji Fentona. Unikanie warunków utleniających, usuwanie kwasów nukleinowych i szybkie oznaczanie próbek może zapobiec artefaktowym wpływom na pomiary karbonylków białek.
Okołoporodowa ekspozycja na Pb2+ zmienia ekspresję genów związanych z neurorozwojowym przesunięciem GABA u szczurów po urodzeniu
Ołów (Pb2+) to neurotoksyczny środek środowiskowy, który zakłóca neurorozwoj, komunikację i organizację poprzez konkurowanie z sygnalizacją Ca2+. Jak okołoporodowa ekspozycja na Pb2+ wpływa na regulację genów związaną z Ca2+, pozostaje niejasna. Jednak Ca2+ aktywuje podjednostkę β-3 kanału wapniowego wrażliwego na napięcie typu L (Ca-β3), która autoreguluje pobudliwość neuronów i odgrywa rolę w przesunięciu GABA z neuroprzekaźnictwa pobudzającego do hamującego .
W sumie osiem samic (n = 4 kontrolne i n = 4 okołoporodowe) i cztery samce (n = 2 kontrolne i n = 2 okołoporodowe) szczurów wykorzystano jako hodowców, aby służyły jako matki i ojcowie.
- Mioty matki każdego miotu wahały się od N = 6-10 młodych na miot (M = 8, SD = 2), niezależnie od leczenia Pb2+, z przewagą samców nad samicami. Ponieważ w każdym z miotów było więcej samców niż samic, aby jak najlepiej ocenić i jednakowo kontrolować wpływ Pb2+- i miotu we wszystkich badanych punktach czasowych rozwoju, samice wykluczono ze względu na niewystarczającą dostępność wielkości próby z uzyskanego miotu. .
- Z włączonych miotów, w niniejszym badaniu wykorzystano 24 eksperymentalnie naiwne samce szczurów rasy Long Evans z kapturem (kontrola N = 12; Pb2+ N = 12). Mózgi wyekstrahowano z kory przedczołowej szczura (PFC) i hipokampu (HP) w dniu poporodowym (PND) 2, 7, 14 i 22, homogenizowano w 1 ml odczynnika TRIzol na 100 mg tkanki przy użyciu homogenizatora ze szkła teflonowego.
- Po odwirowaniu RNA wyekstrahowano chloroformem i wytrącono alkoholem izopropylowym. Próbki RNA następnie ponownie zawieszono w 100 µl H2O traktowanej DEPC. Następnie 10 μg całkowitego RNA potraktowano DNazą wolną od RNaz ( Qiagen ) w 37°C przez 1 godzinę i ponownie oczyszczono przez ekstrakcję 3:1 fenol/chloroform, a następnie wytrącanie etanolem.
- Z oczyszczonego RNA, 1 μg zastosowano w zestawie SYBR GreenER Two-Step qRT-PCR ( Invitrogen) do syntezy pierwszej nici cDNA i ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR). Wpływ okołoporodowej ekspozycji na Pb2+ na geny związane z wczesnym rozwojem neuronalnym i przesunięciem GABA oceniano poprzez ekspresję izoform Ca-β3, GABAAR-β3, NKCC1, KCC2 i GAD 80, 86, 65 i 67.

CircularRNA circ_0071269 knockdown chroni przed uszkodzeniem kardiomiopatii cukrzycowej przez oś microRNA-145/gasdermina A
Okrągłe RNA (circRNA) biorą udział w rozwoju i progresji kardiomiopatii cukrzycowej (DCM). Jednak konkretna funkcja i mechanizm leżący u podstaw circ_0071269 w DCM pozostają niejasne. W naszym badaniu ekspresję mRNA i miRNA wykrywano metodą ilościowej PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR). W celu zbadania charakterystyki circ_0071269 zastosowano traktowanie RNazą R i aktynomycyną D. W celu określenia żywotności komórek, zawartości LDH w komórkach oraz poziomu interleukiny (IL)-1β i IL-18 przeprowadzono test Cell Counting Kit -8 (CCK-8), zestawy do dehydrogenazy mleczanowej (LDH) i ELISA , odpowiednio.
Śmiertelność komórek określono za pomocą cytometrii przepływowej, a Western blot dotyczył poziomów ekspresji białka. Ponadto przeprowadzono testy reporterowe lucyferazy i testy pull-down RNA w celu potwierdzenia związku wiązania między miR-145 i circ_0071269 lub gasderminą A (GSDMA). W celu oceny uszkodzenia mięśnia sercowego in vivo przeprowadzono echokardiografię, barwienie hematoksyliną i eozyną (HE) oraz barwienie immunohistochemiczne (IHC) .
Odkryliśmy, że circ_0071269 ulegał znacznej nadekspresji w komórkach H9c2 po potraktowaniu wysokim poziomem glukozy. Powalenie circ_0071269 promowało żywotność komórek i hamowało odpowiedź zapalną, cytotoksyczność i piroptozę komórek H9c2 in vitro . Co więcej, circ_0071269 gąbki miR-145 w celu zwiększenia GSDMA. Inhibitor miR-145 antagonizował wpływ knockdown circ_0071269 na funkcje komórkowe komórek H9c2, podczas gdy wpływ miR-145 został zniesiony przez nadekspresję GSDMA . Tymczasem knockdown circ_0071269 osłabił dysfunkcję serca u myszy DM. W związku z tym circ_0071269 może promować rozwój DCM poprzez oś miR-145/GSDMA, a tym samym zapewnić nowy marker do leczenia DCM.
Circ_0001206 reguluje oś miR-665/CRKL, aby złagodzić uszkodzenie kardiomiocytów wywołane niedotlenieniem/reoksygenacją w zawale mięśnia sercowego
Zawał mięśnia sercowego (MI) to rodzaj choroby sercowo-naczyniowej spowodowanej martwicą mięśnia sercowego. Coraz więcej dowodów sugeruje, że okrągłe RNA (circRNA) odgrywają kluczową rolę w uszkodzeniu MI wywołanym niedotlenieniem/reoksygenacją serca (H/R).
Ustalono model niedotlenienia/reoksygenacji komórek H9C2 i wykryto ekspresję około 0001206 za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym. Testy rybonukleazy R ( RNazy R) i aktynomycyny D (Akt D) potwierdziły stabilność. Zestaw do liczenia komórek -8 (CCK-8), testy western blot, TUNEL i cytometria przepływowa oceniały żywotność komórek i apoptozę komórek. Obniżanie RNA, immunoprecypitacja białek wiążących RNA (RIP) i testy reporterowe lucyferazy badały mechanizmy leżące u podstaw MI. Wszystkie dane eksperymentalne zostały przedstawione ze średnią ± odchylenie standardowe (SD) i P < 0,05 wskazywały na istotność statystyczną. Circ_0001206 miał niską ekspresję w komórkach H9C2 poddanych działaniu H/R. Circ_0001206 powstał w wyniku cyklizacji CRK, takiego jak protoonkogen, białko adaptacyjne (CRKL). Nadekspresja Circ_0001206 promowała żywotność komórek i hamowała apoptozę kardiomiocytów. Potwierdzono, że circ_0001206 reguluje ekspresję CRKL poprzez działanie jako konkurujący endogenny RNA (ceRNA) mikroRNA-665 (miR-665). CRKL odegrał ochronną rolę w MI.
Okrągły RNA circ_0000644 promuje progresję raka brodawkowatego tarczycy poprzez gąbkę miR-1205 i regulację ekspresji E2F3
Rozregulowanie kolistych RNA (circRNA) ułatwia nowotworzenie raka brodawkowatego tarczycy (PTC). Celem tego badania było określenie funkcji i mechanizmu circ_0000644 w regulowaniu rozwoju PTC. Ekspresje Circ_0000644, microRNA-1205 (miR-1205) i E2F czynnika transkrypcyjnego 3 (E2F3) wykryto za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (qRT-PCR). Testy z aktynomycyną D (ActD) i rybonukleazą R ( RNaza R) zastosowano do weryfikacji kołowej charakterystyki circ_0000644. Po stłumieniu circ_0000644 wzrost komórek PTC, migrację, inwazję i apoptozę oceniano odpowiednio za pomocą zestawu do liczenia komórek -8 (CCK-8), testu Transwell i analizy cytometrii przepływowej.
RNase Activity Detection/Quantification Assay Kit (Fluorometric) |
|||
K934-100 | Biovision | each | 574.8 EUR |
DNase (RNase-free) |
|||
abx098138-1500U | Abbexa | 1500 U | 543.6 EUR |
DNA Methylation Detection Kit |
|||
K5082100 | Biochain | 1 kit | 337 EUR |
SEB Detection Kit |
|||
6030 | Chondrex | 1 kit | 663.78 EUR |
LPS Detection Kit |
|||
6039 | Chondrex | 1 kit | 404 EUR |
HMGB1 Detection Kit |
|||
6010 | Chondrex | 1 kit | 903.9 EUR |
Gliadin Detection Kit |
|||
6035 | Chondrex | 1 kit | 377 EUR |
DNASE I, RNASE FREE |
|||
DD0649 | Bio Basic | 50KU | 537.64 EUR |
Apoptotic DNA Ladder Detection Kit |
|||
EBA15100 | EnoGene | 100 assays | 180 EUR |
Apoptotic DNA Ladder Detection Kit |
|||
EBA1520 | EnoGene | 20 assays | 55 EUR |
Apoptotic DNA Ladder Detection Kit |
|||
EBA1550 | EnoGene | 50 assays | 100 EUR |
Apoptosis Detection Kit |
|||
ANXVKB-100T | ImmunoStep | 100 test | 557.64 EUR |
Apoptosis Detection Kit |
|||
ANXVKCFB-100T | ImmunoStep | 100 test | 495.24 EUR |
Apoptosis Detection Kit |
|||
ANXVKCFB7-100T | ImmunoStep | 100 test | 495.24 EUR |
Apoptosis Detection Kit |
|||
ANXVKDY-100T | ImmunoStep | 100 test | 467.16 EUR |
Apoptosis Detection Kit |
|||
ANXVKF-100T | ImmunoStep | 100 test | 395.4 EUR |
Apoptosis Detection Kit |
|||
ANXVKF7-100T | ImmunoStep | 100 test | 395.4 EUR |
Apoptosis Detection Kit |
|||
ANXVKPE-100T | ImmunoStep | 100 test | 415.68 EUR |
Autophagy Detection Kit |
|||
abx299014-50tests | Abbexa | 50 tests | 627.6 EUR |
Autophagy Detection Kit |
|||
abx299015-200tests | Abbexa | 200 tests | 1045.2 EUR |
Ubiquitin Detection Kit |
|||
SKT-131-20 | Stressmarq | 20 assays | 594 EUR |
Ara h6 Detection Kit |
|||
6042 | Chondrex | 1 kit | 377 EUR |
Ara h2 Detection Kit |
|||
6043 | Chondrex | 1 kit | 377 EUR |
RNase FREE, 250ml Bottle Removes RNase & DNAse |
|||
10-172 | Genesee Scientific | 1 Bottle/Unit | 269 EUR |
DNase I (RNase-free) |
|||
K1088-1000 | ApexBio | 1000U | 50 EUR |
DNase I (RNase-free) |
|||
K1088-10000 | ApexBio | 10000U | 400 EUR |
DNase I (RNase-free) |
|||
K1088-5000 | ApexBio | 5000U | 224 EUR |
Senescence Detection Kit |
|||
55R-1370 | Fitzgerald | 250 tests | 854.4 EUR |
Senescence Detection Kit |
|||
K2030-250 | ApexBio | 250 Staining | 552 EUR |
Senescence Detection Kit |
|||
K320-250 | Biovision | each | 561.6 EUR |
Mycoplasma detection kit |
|||
E28XB0087 | EnoGene | 50T | 311.11 EUR |
RNase-Free DNase Set |
|||
BS88253 | Bio Basic | 50preps | 175.1 EUR |
GenomeCoV19 Detection Kit |
|||
G628 | ABM | 100 Rxns | 384 EUR |
GenomeCoV19 Detection Kit |
|||
G628.v2 | ABM | 100 Rxns | 384 EUR |
Glutathione Detection Kit |
|||
SKT-202-96 | Stressmarq | 1 plate of 96 wells | 513.6 EUR |
Protein A Detection Kit |
|||
abx090813-1Kit | Abbexa | 1 Kit | 1897.2 EUR |
PCR-STEC Detection Kit |
|||
K1452-96 | Biovision | each | 940.8 EUR |
Rat Albumin Detection Kit |
|||
3020 | Chondrex | 1 kit | 580.26 EUR |
COVID19 PCR detection kit |
|||
BSV-qPCR-07 | BioServUK | 100 reactions | Ask for price |
Residual SDS Detection Kit |
|||
BSP055 | Bio Basic | 100Assays | 99.67 EUR |
Nitric Oxide Detection Kit |
|||
SKT-212-96 | Stressmarq | 2 plates of 96 wells | 410.4 EUR |
Quick Apoptotic DNA Ladder Detection Kit |
|||
K120-50 | Biovision | each | 548.4 EUR |
Quick Apoptotic DNA Ladder Detection Kit |
|||
K2194-50 | ApexBio | 50 assays | 568.8 EUR |
RNase FREE, 1 Liter Bottle Removes RNase & DNAse |
|||
10-173 | Genesee Scientific | 1 Bottle/Unit | 337 EUR |
RNase FREE, 4 Liter Bottle Removes RNase & DNAse |
|||
10-456 | Genesee Scientific | 1 Bottle/Unit | 403 EUR |
CHO Host Cell DNA Detection Kit in tubes |
|||
D550T | Cygnus Technologies | 1 kit (50 tubes) | 1356 EUR |
CHO Host Cell DNA Detection Kit in wells |
|||
D550W | Cygnus Technologies | 1 kit (96 wells plate) | 1356 EUR |
PCR Mycoplasma Detection Kit |
|||
abx098883-100rxns | Abbexa | 100 rxns | 644.4 EUR |
PCR Mycoplasma Detection Kit |
|||
abx298017-100rxns | Abbexa | 100 rxns | 376.8 EUR |
PCR Mycoplasma Detection Kit |
|||
M034-Kit | TOKU-E | Kit | 319.2 EUR |
Mycoplasma PCR Detection Kit |
|||
K1476-100 | Biovision | 100 Rxns | 357.6 EUR |
PCR Mycoplasma Detection Kit |
|||
E36G238 | EnoGene | 100 Reactions | 228.57 EUR |
E.coli Host Cell DNA Detection Kit in tubes |
|||
D410T | Cygnus Technologies | 1 kit (50 tubes) | 1179.6 EUR |
E.coli Host Cell DNA Detection Kit in wells |
|||
D410W | Cygnus Technologies | 1 kit (96 wells plate) | 1179.6 EUR |
RNase FREE, 475ml Spray Bottle Removes RNase & DNAse |
|||
10-228 | Genesee Scientific | 1 Spray Bottle/Unit | 300 EUR |
DNase I (not RNase FREE) |
|||
DD0099 | Bio Basic | 250mg | 117.42 EUR |
Enhanced Apoptotic DNA Ladder Detection Kit |
|||
K130-50 | Biovision | each | 529.2 EUR |
Enhanced Apoptotic DNA Ladder Detection Kit |
|||
K2202-50 | ApexBio | 50 assays | 568.8 EUR |
NS/0 Host Cell DNA Detection Kit in tubes |
|||
D220T | Cygnus Technologies | 1 kit (50 tubes) | 1179.6 EUR |
NS/0 Host Cell DNA Detection Kit in wells |
|||
D220W | Cygnus Technologies | 1 kit (96 wells plate) | 1179.6 EUR |
PCR-Salmonella Detection Kit |
|||
K1447-96 | Biovision | each | 744 EUR |
Urine Creatinine Detection Kit |
|||
SKT-200-192 | Stressmarq | 2 plates of 96 wells | 410.4 EUR |
Creatinine Serum Detection Kit |
|||
SKT-217-192 | Stressmarq | 2 plates of 96 wells | 410.4 EUR |
Human Host Cell DNA Detection Kit in tubes |
|||
D160T | Cygnus Technologies | 1 kit (50 tubes) | 1179.6 EUR |
Human Host Cell DNA Detection Kit in wells |
|||
D160W | Cygnus Technologies | 1 kit (96 wells plate) | 1179.6 EUR |
Hydrogen Peroxide Detection Kit |
|||
SKT-216-192 | Stressmarq | 2 plates of 96 wells | 529.2 EUR |
MitoStep + Apoptosis Detection Kit |
|||
KMAF-100T | ImmunoStep | 100 test | 504.6 EUR |
Ubiquitin Interact Detection Kit |
|||
SKT-132-20 | Stressmarq | 20 assays | 556.8 EUR |
PCR-Campylobacter Detection Kit |
|||
K1453-96 | Biovision | each | 940.8 EUR |
SARS-CoV-2 IgG Detection Kit (Colorimetric Anti-Spike RBD IgG detection) |
|||
79985 | BPS Bioscience | 96 rxns. | 590 EUR |
Mycoplasma Detection Kit (OKSB00010) |
|||
OKSB00010 | Aviva Systems Biology | 50 Tests | 458.4 EUR |
COVID-19 Antigen Detection Kit |
|||
BSV-G61RHA20 | BioServUK | 20 tests | Ask for price |
Luciferase Mycoplasma Detection Kit |
|||
20-abx098882 | Abbexa |
|
|
MitoCapture Apoptosis Detection Kit |
|||
55R-1305 | Fitzgerald | 25 assays | 332.4 EUR |
Luciferase Mycoplasma Detection Kit |
|||
20-abx298016 | Abbexa |
|
|
SARS-CoV-2 IgG Detection Kit (Colorimetric Trimer Anti-Spike IgG detection) |
|||
79975 | BPS Bioscience | 96 rxns. | 765 EUR |
Blood Urea Nitrogen Detection Kit |
|||
SKT-213-192 | Stressmarq | 2 plates of 96 wells | 513.6 EUR |
TUNEL FITC Apoptosis Detection Kit |
|||
A111-01 | Vazyme | 20 rxn | 339.6 EUR |
TUNEL FITC Apoptosis Detection Kit |
|||
A111-02 | Vazyme | 50 rxn | 490.8 EUR |
TUNEL FITC Apoptosis Detection Kit |
|||
A111-03 | Vazyme | 100 rxn | 646.8 EUR |
PCR-Legionella spp Detection Kit |
|||
K1450-96 | Biovision | each | 777.6 EUR |
Senescence Detection Kit (Fluorometric) |
|||
K991-100 | Biovision | each | 861.6 EUR |
Formaldehyde Detection Kit (1 Plate) |
|||
K001-F1 | Arbor Assays | 2x96 well plate | 448 EUR |
ResiDNA Precise Quantitative CHO DNA Detection Kit |
|||
RD102-01 | Vazyme | 100 rxns (30 μl/rxn) | 927.6 EUR |
Rat Type I Collagen Detection Kit |
|||
6013 | Chondrex | 1 kit | 808.2 EUR |
Agarose Tablets , DNase/RNase Free |
|||
BIO-41027 | Bioline | 300g | Ask for price |
CRISPR Genomic Cleavage Detection Kit |
|||
G932 | ABM | 25 Reactions | 246 EUR |
CRISPR Genomic Cleavage Detection Kit |
|||
K1250-25 | Biovision | each | 483.6 EUR |
SDS 20%, DNase and RNase Free |
|||
41930020-1 | Bio-WORLD | 200 mL | 47.72 EUR |
Human Type I Collagen Detection Kit |
|||
6021 | Chondrex | 1 kit | 886.5 EUR |
Pure-IP Western Blot Detection Kit |
|||
PRB-5002 | Cell Biolabs | 20 blots | 470.4 EUR |
Mouse Type I Collagen Detection Kit |
|||
6012 | Chondrex | 1 kit | 808.2 EUR |
Cholesterol Detection Kit (cell-based) |
|||
K587-100 | Biovision | each | 352.8 EUR |
Human CCL5 Detection Assay Kit |
|||
6822 | Chondrex | 1 kit | 580.26 EUR |
NGAL (Detection Ab) |
|||
abx019242-100ug | Abbexa | 100 ug | 777.6 EUR |
TLR Detection Set |
|||
PSI-1806 | ProSci | 1 Set | 1627.8 EUR |
PD1 Detection Set |
|||
SD8600 | ProSci | 1 Set | 537.9 EUR |
TUNEL BrightRed Apoptosis Detection Kit |
|||
A113-01 | Vazyme | 20 rxn | 367.2 EUR |
TUNEL BrightRed Apoptosis Detection Kit |
|||
A113-02 | Vazyme | 50 rxn | 547.2 EUR |
TUNEL BrightRed Apoptosis Detection Kit |
|||
A113-03 | Vazyme | 100 rxn | 786 EUR |
Zależności regulacyjne między circ_0000644, E2F3 i miR-1205 potwierdzono w teście immunoprecypitacji RNA (RIP) i teście reporterowym z podwójną lucyferazą. Poza tym wpływy regulacyjne circ_0000644 na poziom białka E2F3 analizowano metodą Western blot. W PTC circ_0000644 wykazywał wysoką ekspresję i był zlokalizowany głównie w cytoplazmie i miał stabilną strukturę. Uderzenie circ_0000644 zahamowało wzrost, migrację i inwazję komórek PTC oraz ułatwiło apoptozę. Circ_0000644 mógł bezpośrednio oddziaływać z miR-1205 w celu zahamowania ekspresji miR-1205 i służył jako gąbka miR-1205 do modulowania ekspresji E2F3 w komórkach PTC. Circ_0000644 zwiększa ekspresję E2F3 przez gąbkowanie miR-1205 w celu promowania progresji PTC.